Contador de partículas
Este analizador es capaz de proporcionar datos de recuento y concentración de células o partículas, así como la distribución de tamaños de la población. Emplea el principio Coulter para la medida del volumen real de células. La técnica proporciona exactitud, reproducibilidad, velocidad y versatilidad.
Con él se pueden valorar numerosos parámetros biológicos y ecológicos, entre otros, estimar el estado fisiológico y de estrés de un organismo, contar y caracterizar la flora microbiana y bacteriana asociada a los suelos y a muestras acuosas, el conteo de granos de polen de una muestra, etc.
Es capaz de mostrar el gráfico de distribución de tamaños, así como la estadística y el recuento en áreas seleccionables del gráfico. También puede realizar promedios de recuento de hasta 10 muestras.
Principio Coulter: en un contador Coulter, un tubo con un pequeño orificio en la pared (en el caso de nuestro equipo tenemos uno de 50µm, que mide partículas entre 1-30µm de diámetro y otro de 100 µm para medir partículas de 2-60 µm), se sumerge en un vaso que contiene las partículas suspendidas en un electrolito (Isotón II).
Se emplean dos electrodos, uno dentro del tubo y otro dentro del vaso, de modo que la corriente fluye entre ellos a través del electrolito, pasando por el orificio del tubo, cuando se aplica una diferencia de potencial entre ellos. Se mide entonces la impedancia entre los electrodos.
La apertura crea una “zona sensible”, que permite detectar las partículas cuando atraviesan el orificio. Cuando esto ocurre, la partícula desplaza su propio volumen de electrolito a medida que pasa por el orificio, lo que crea un aumento momentáneo de la resistencia al paso de corriente a través del orificio. Este pulso puede medirse como un cambio de voltaje o de corriente.
La altura del pulso producido es proporcional al volumen de la partícula. Si la densidad de todas las partículas es la misma, el pulso es entonces proporcional también a la masa de cada partícula.
El contador Coulter emplea circuitos capaces de contar los pulsos producidos, y de analizar su altura, de modo que se puede determinar el número de partículas que han atravesado el orificio, así como el volumen de cada una de ellas.
Si se mide de forma precisa el volumen de líquido que ha pasado por el orificio, es posible determinar la concentración de la muestra en número de partículas por mL.
Muestras
Introducir la muestra en una cubeta ACCUVETE de 25x25mL y enrasarla con solución salina Isotón II. El volumen mínimo de muestra deber ser suficiente para que se cubra el lector del tubo de apertura. En caso de que se quiera usar la varilla homogeneizadora no es conveniente usa las cubetas, si no el vaso. Se recomienda agitar la muestra previamente en el vórtex para evitar que las partículas sedimenten.